懸浮細(xì)胞如何固定才能做出好的免疫熒光？

免疫熒光(IF)是一種定位檢測(cè)手段，它不僅能顯示蛋白在細(xì)胞內(nèi)的定位，還能輸出令人驚奇的彩圖。越來(lái)越多的期刊將IF圖作為關(guān)鍵數(shù)據(jù)，由此可見(jiàn)IF在科學(xué)和美學(xué)上的吸引力。細(xì)胞免疫熒光(IF-IC)需細(xì)胞生長(zhǎng)/附著在玻璃載玻片上進(jìn)行，在進(jìn)行清洗、固定、破膜和染色時(shí)，細(xì)胞必須附著足夠牢固。

懸浮細(xì)胞固定免疫熒光中的挑戰(zhàn)

由于懸浮細(xì)胞不依賴支持物表面生長(zhǎng)，其在玻片上的粘附是一大挑戰(zhàn)。傳統(tǒng)離心甩片或涂片法制備的細(xì)胞片存在細(xì)胞分布不均或固定不牢的問(wèn)題，影響后續(xù)染色和顯微觀察。IF-IC通常不作為懸浮細(xì)胞的檢測(cè)手段，這是因?yàn)閼腋〖?xì)胞粘附玻片能力的不足仍是一大難題。

一般貼壁細(xì)胞粘附在包被的玻片上，但懸浮細(xì)胞并不適合，在科學(xué)刊物中避免使用懸浮細(xì)胞IF-IC的傾向非常明顯。但若您研究某個(gè)蛋白在懸浮細(xì)胞中的表達(dá)，您能將懸浮細(xì)胞牢固地粘在蓋玻片上IF-IC嗎？首先，您可使用特殊的離心柱和離心機(jī)使細(xì)胞粘附在玻片上。您也可以先對(duì)懸浮細(xì)胞進(jìn)行固定、破膜、染色和清洗，最后將它們粘附在包被玻片上。這兩種方法都需復(fù)雜步驟，對(duì)于特定細(xì)胞需優(yōu)化條件。如果能讓懸浮細(xì)胞粘附在玻片上，讓它們能像貼壁細(xì)胞一樣IF-IC，一直是一個(gè)痛點(diǎn)？

懸浮細(xì)胞固定免疫熒光玻片解決方案

為克服以上挑戰(zhàn)，靶點(diǎn)科技聯(lián)合Shikhar開(kāi)發(fā)出專門的懸浮細(xì)胞免疫熒光專用Shi-fix玻片，您只需添加懸浮細(xì)胞、無(wú)需離心即可將細(xì)胞牢固地粘附在玻片，后續(xù)可對(duì)粘附細(xì)胞進(jìn)行特定刺激。懸浮細(xì)胞可在玻片上單層生長(zhǎng)，后續(xù)可像貼壁細(xì)胞般進(jìn)行IF-IC，顯著簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)流程并提高染色效率。

懸浮細(xì)胞固定免疫熒光玻片操作步驟

1. 用PBS清洗收集的懸浮細(xì)胞，并用PBS將其重懸為2~5×10⁶/mL濃度的細(xì)胞懸液；

2. 為便于操作，將Shi-fix™玻片放在12孔板中。將細(xì)胞懸液滴加Shi-fix™玻片上(2~3×10⁵個(gè)細(xì)胞/玻片)，體積控制在100ul，具體看樣品細(xì)胞總量；

3. 將含Shi-fix™玻片的12孔板放在水平臺(tái)面上，室溫靜置讓細(xì)胞附著20~30分鐘(對(duì)于某些類型的細(xì)胞，孵育時(shí)間越長(zhǎng)附著效果越好，但不要超過(guò)1小時(shí))；

4. 向含Shi-fix™玻片的12孔板兩側(cè)邊緣加入2 mL PBS(不可直接滴到玻片)，輕柔搖動(dòng)3~5分鐘清洗未粘附的細(xì)胞(可放置水平搖床上緩慢搖動(dòng))。

5. 顯微鏡檢查細(xì)胞附著情況。如需進(jìn)一步培養(yǎng)，加入1mL培養(yǎng)基；或者直接進(jìn)行固定、破膜和免疫熒光染色。

懸浮細(xì)胞固定免疫熒光玻片數(shù)據(jù)圖片

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